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行業動態

切向流系統在蛋白質濃縮與緩沖液置換中的應用

添加時間:2025-04-16 11:02:45   瀏覽次數:613  

蛋白質濃縮與緩沖液置換

應用場景
從低濃度蛋白溶液(如細胞培養上清或粗提液)中去除小分子雜質(鹽離子、溶劑等),同時濃縮目標蛋白至所需濃度。

操作流程

  • ?膜包選擇:根據目標蛋白分子量選擇截留分子量(MWCO)合適的超濾膜(例如,30 kDa膜用于濃縮150 kDa的抗體)。
  • ?系統組裝:組裝TFF系統(蠕動泵、膜包、壓力表、儲液罐),用純水預沖洗膜包以去除保存劑。
  • ?循環濃縮:將蛋白溶液泵入系統,調節蠕動泵轉速(例如200 RPM)和背壓閥,控制跨膜壓力(TMP)在1~3 bar。
  • ?緩沖液置換:在濃縮過程中持續添加新緩沖液(透析模式),置換原液中的鹽或雜質。
  • ?終點判定:通過UV監測(A280吸光度)或體積減少比例(如濃縮10倍)確定終點。

優勢

  • 避免傳統透析法的長時間等待和低效問題。
  • 可處理大體積樣品(如1 L→10 mL),且活性回收率>90%。

注意事項

  • 避免過度濃縮導致蛋白聚集(控制TMP不超過膜耐受極限)。
  • 操作后立即用0.1 M NaOH清洗膜包,防止蛋白殘留污染。
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