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Biuret法的蛋白質含量測定方法描述

添加時間:2023-11-17 17:00:43   瀏覽次數:1622  

Biuret法是一種常用的蛋白質含量測定方法,通過其與蛋白質結合產生的顏色反應來測定蛋白質的含量。

樣品制備:首先,需要將待測的蛋白質樣品制備成適當的溶液。通常情況下,將蛋白質溶解在適當的緩沖液中,以確保反應的穩定性和準確性。

加入試劑:將樣品溶液加入到含有Biuret試劑的試管或反應皿中。Biuret試劑通常由堿性銅溶液和鈉鉀氫氧化物組成。

反應產生:當蛋白質與Biuret試劑反應時,會產生紫色的絡合物。這是因為蛋白質中的蛋白質質量大約為200個氨基酸殘基,而Biuret試劑中的銅離子與蛋白質中的兩個或更多的肽鍵結合形成絡合物,從而產生紫色的化合物。

測定吸光度:將反應產物的吸光度測定在特定波長下,通常在540nm左右。吸光度與蛋白質的濃度成正比,因此可以通過吸光度的測定來間接測定蛋白質的含量。

對照標準曲線:為了確定樣品中蛋白質的含量,通常需要制備一系列已知濃度的蛋白質標準溶液,測定它們的吸光度,并繪制標準曲線。然后,將待測樣品的吸光度與標準曲線進行比較,從而確定樣品中蛋白質的含量。

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